УНІВЕРСИТЕТ СІМЕНА БОЛВАРА ДЕКАН ПІСЛІПУНТОВОГО НАВЧАННЯ ХАРЧОВА НАУКА ТА ХАРЧУВАННЯ ХАРЧУВАННЯ СТУПЕНЬ МАГІСТРА В ХАРЧОВІЙ СТУПЕНІ РОБОТА АЛЕРГЕНІЧНА МОЖЛИВОСТЬ БІЛОК ХІНЧОНХО (Cajanus cajan) Жовтень Габріель Хосе Граузе Жовтень 2010
УНІВЕРСИТЕТ СІМЕНА БОЛВАРА ДИНАН ПІСЛІПУНТОВОГО НАВЧАННЯ ХАРЧОВА НАУКА ТА ХАРЧОВА КООРДИНАЦІЯ МАГІСТР ХАРЧОВОЇ НАУКИ АЛЛЕРГЕННА МОЖЛИВОСТЬ КВІНЧОНШО БІЛКА (Cajanus cajan) За порадою професора: Викладач Алексії Торрес, професор Педро Асо Котутор, жовтень 2010 року
iv ПОСВІТЛЕННЯ З усією любов’ю пам’яті моєї матері Рози Гонсалес та моїх бабусь і дідусів Педро Гонсалеса та Мерседес Прада де Гонсалес, які завжди будуть живі в моєму серці. Їхні вчення, цінності та принципи - це найбільший скарб, який вони змогли мені запропонувати.
viii 2.5.2) Виявлення та кількісне визначення ендотоксинів за допомогою методу 38 Гель-Клот. 2.5.3) Модель внутрішньочеревної сенсибілізації (i.p). 40 2.5.4) Аналіз гомологічної пасивної шкірної анафілаксії (ACPH). 41 2.6) Непрямий імуноферментний аналіз для виявлення мишей IgG (ІФА). 42 2.6.1) Визначення оптимального розведення кон’югату igg проти миші. 42 2.6.2) Визначення оптимального розведення антигену та антисироватки. 42 2.6.3) Загальний протокол непрямого ІФА для виявлення специфічних мишей IgG . 44 2.7) Статистичний аналіз . 45 ГЛАВА III: РЕЗУЛЬТАТИ ТА ОБГОВОРЕННЯ. 47 3.1) Хімічний аналіз білків квінчо. 47 3.2) Електрофорез білків 47 3.3) Аналіз гомологічної пасивної шкірної анафілаксії (ACPH). 53 3.4) Непрямий ІФА для виявлення мишачого специфічного IgG. 64 3.4.1) Визначення оптимального розведення кон’югату igg проти миші. 64 3.4.2) Непрямий ІФА для визначення розведення мишачої сироватки та концентрації антигену. 65 3.4.3) Загальний протокол непрямого ІФА для виявлення специфічних мишей IgG. 66 ГЛАВА IV: ВИСНОВКИ ТА РЕКОМЕНДАЦІЇ . 71 4.1) Висновки . 71 4.2) Рекомендації . 72 ГЛАВА V: ЛІТЕРАТУРА . 73 ГЛАВА VI: ДОДАТКИ 80
ІНДЕКС ФІГУР ix Рисунки Сторінка 1.1. Нетоксичні побічні реакції на їжу. 20 3.1. SDS-PAGE білкові екстракти сухої зеленої птиці. 48 3.2. SDS-PAGE Білкові екстракти сухого гороху зеленого голуба, люпину та сої 48 3.3. Аналіз ACPH на білок зеленої птиці. 54 3.4. Аналіз ACPH на сухий білок птиці. 56 3.5. Аналіз ACPH на білок люпину. 57 3.6. Прямий ІФА для визначення оптимального розведення кон’югату. 64 3.7. Непрямий ІФА для визначення розведення мишачої сироватки та концентрації антигену. 65 3.8. Специфічний рівень IgG проти білка гороху зеленого голуба. 66 3.9. Специфічний рівень IgG щодо сухого білка птиці. 67 3.10. Специфічні рівні IgG проти білка люпину. 68
СПИСОК СКОРОЧЕНЬ x Ac: антитіла. ACPH: гомологічна пасивна шкірна анафілаксія. Ag: антиген. ANOVA: дисперсійний аналіз. AOAC: Асоціація офіційних аналітичних хіміків. CD: кластер диференціації. ЦСЄ: стандартний контроль ендотоксинів. HCM: основний комплекс гістосумісності. APC: клітина, що представляє антиген. КОВЕНІН: Венесуельська комісія з промислових стандартів. DS: стандартне відхилення. ІФА: імуноферментний аналіз. ФАО: Продовольча та сільськогосподарська організація. IAA: індекс водопоглинання. IFBC: Міжнародна рада з біотехнологій. Ig: імуноглобуліни. ІЛ: інтерлейкін. ILSI: Міжнародний інститут наук про життя. ISO: Міжнародна організація зі стандартизації IT: інгібітори трипсину. ITAM: імунорецептор тирозину. HACCP: аналіз небезпеки та критичні контрольні точки. LAL: амебоцитарний лізат Limulus polyphemus. LPS: ліпополісахариди. СОЛОД: лімфоїдні тканини, пов’язані зі слизовою. MG: середнє геометричне. nsltps: неспецифічні ліпід-транспортуючі білки. ПЛР: ланцюгова реакція полімерази. PER: коефіцієнт ефективності білка. RCB: В-клітинний антигенний рецептор. S: Сведберг. SSF: фізіологічний сольовий розчин. TGF-β: фактор росту пухлини β. ЄС: одиниці ендотоксину. ВООЗ: Всесвітня організація охорони здоров’я.