Бібліометричні дані:
Citescore: 0,4 | Рейтинг журналу SCImago: 0,12 | Google Scholar: 0,0172

високий

Журнал відповідно до стандартів "Єдині вимоги до рукописів, що надходять до біомедичних журналів" www.icmje.org

Журнал дотримується принципів і процедур, продиктованих "Комітетом з етики публікацій (COPE)" www.publicationethics.org

Журнал дотримується принципів прозорості та найкращих практик у публікаціях DOAJ www.doaj.org

(PDF) Rev Osteoporos Metab Miner. 2017 р .; 9 (4): 114-120
DOI: http://dx.doi.org/10.4321/S1889-836X2017000400003

Ключові слова: Метилювання ДНК, ПТГ, хронічне захворювання нирок, паращитовидних залоз, гіперфосфатемія.

Матеріал і методи
Експериментальне дослідження
Для дослідження були використані 4-місячні самці щурів Wistar з тваринницької установи Університету Ов'єдо, які були піддані 7/8 нефректомії (NX), що полягає у видаленні трьох чвертей лівої нирки та загальній резекції нирки. право 14 .
Відразу після нефректомії група уремічних тварин продовжила підтримуючу дієту для гризунів, що має нормальний вміст (N) фосфору (P) (0,6%; група NX-NP), тоді як інша група пацієнтів з нефректомізованими тваринами отримувала дієту з високий вміст (Е) фосфору (0,9%; група NX-EP) протягом 20 тижнів.
Під час жертвоприношення під наркозом СО2 та знекровленням збирали сироватку для визначення загальних маркерів ступеня ХХН та змін у метаболізмі кісток та мінералів, а також паращитовидних залоз кожної експериментальної групи (14 залоз по 7 щурів на групу ) зберігають при -80ºC до використання.

Аналіз метилювання промоторів досліджуваних генів за допомогою піросеквенування бісульфіту
Фенол-хлороформний метод застосовувався для вилучення геномного матеріалу з паращитовидних залоз щурів. ДНК, витягнуту з паращитовидних залоз, обробляли бісульфітом натрію, дотримуючись інструкцій набору для бісульфітації EZ DNA Methylation-Gold ™ Kit D5005 »(Zymo Research, Orange, США). Потім була проведена специфічна ланцюгова реакція полімерази (ПЛР) з біотинільованими праймерами, за яким слідував протокол піросеквенування (PyroMark QUIAGEN® Q24), що складається з денатурації подвійних ланцюгів продуктів ПЛР для отримання одинарних ланцюгів, один з яких мічений біотином. Біотинільоване ланцюг використовували як шаблон для зв'язування праймера для секвенування. За допомогою комп’ютерної програми Pyromark 2.0.6 характер метилування області промоторів генів PTH, VDR, CaSR та Klotho між початком транскрипції до 5 'кінця аналізували за допомогою пар праймерів, показаних у таблиці 1.

Дякую: Ця робота стала можливою завдяки фінансуванню, отриманому грантом FEIOMM 2014 для сприяння трансляційним дослідженням. Агустіну Фернандесу Фернандесу з лабораторії епігенетики Ов'єдо за його пропозиції щодо рукопису. Ця робота також була частково профінансована за допомогою Національного плану R + D + I на 2008-2011 роки, Державного плану R + D + I 2013-2016, Інституту охорони здоров'я Карлоса III (ISCIII) - Європейського фонду регіонального розвитку (PI 09/00415), План науки, технологій та інновацій на 2013-2017 роки Князівства Астурія (GRUPIN14-028), Фонд сприяння прикладним науковим дослідженням та технологіям в Астурії (FICYT), Інститут нефрологічних досліджень Рейни Софії, Fundación Renal Íñigo Альварес де Толедо, RETIC RedInRen ISCIII - Європейський фонд регіонального розвитку (RD06/0016/1013, RD12/0021/1023 та RD16/0009), Астурійське товариство Fomento Metabolic Research.

Конфлікт інтересів: Автори заявляють, що не мають конфлікту інтересів.

Маніпуляції з експериментальними тваринами проводились відповідно до положень чинного законодавства (Директива Європейського Союзу 2010/63/ЄС та Королівський указ 53/2013 від 1 лютого).