UniversidaddeExtremadura Факультет наук Факультет ofBiomedical наук Область ofMicrobiology докторська дисертація Ідентифікація та функціональний аналіз генів, що беруть участь в dischargingomycescerevisiarevised phosphorylationdenoligosaccharides Представлено paraoptaralDegree ofDoctorby: IsaacCorbachoCuello Badajozni, 25thAdvancedProgramme ofNaturalism і BiologyCorbachoCorbachoCuello Бадахос, 25thAdvancedNovember2008Department ofNaturalism і BiologyAdvancedNovember2008Development ofNaturalism і BiologyAdvancedNovember2008Development ofNaturalism і BiologyAdvancedNovember2008Dept.

відділ

Під редакцією: Університет де Естремадура Кальдерерос Служба публікацій 2. Кацерес 3-го поверху 10071 Електронна пошта: [email protected] http://www.unex.es/publicaciones

Університет Естремадури КАФЕДРА ЕАНАТОМІЇ, КЛІТИННОЇ БІОЛОГІЇ ТА ЗООЛОГІЇ Факультет біології будівлі Avda.deElvass/n 06071Бадахос д-р ГервазіоМартін Партідо, директор департаменту анатомії, клітинної біології та зоології в Університеті Естремадура, відповідальний за програму PhD Організації Докторантура: під назвою: Ідентифікація та функціональний аналіз генів Saccharomyces cerevisiae, які беруть участь у фосфорилюванні N-олігосахаридів, представлених cord.isaaccorbachocollo для вибору на здобуття наукового ступеня професора. Ізабель Оліверо Хіменес, у Департаменті біомедичних наук країни Басків, у Департаменті біомедичних наук країни Басків, у наступній галузі біомедичних наук, у Департаменті біомедичних наук Сполучених Штатів Америки та наступний Біомедичний університет., 30 червня 2008 р. Підписано: Гервазіо Мартін, директор партії Департаменту анатомії, клітинної біології та зоології

Університет Естремадура DEPARTAMENTODECIENCIASBIOMÉDICAS ÁREADEMICROBIOLOGÍA FacultaddeCiencias EdificioJuanRemónCamacho Avda.deElvass/н 06071Badajoz Лікарі Луїс М. Ернандес Мартін і Ізабель Оліверо Jimenez, ProfesoresTitularesdelDepartamentodeCienciasBiomédicasdelaUniversidad deextremadura засвідчується QueellicenciadoD.IsaacCorbachoCuelloharealizadoeltrabajotitulado Ідентифікація та функціональний аналіз генів Saccharomyces CEREVISIAE бере участь в фосфорилировании Noligosacáridos під його керівництвом, в кафедри біомедичних наук (мікробіологія) Університету Естремадури, щоб обрати ступінь доктора. І щоб дозволити їх представлення та оцінку відповідним судом, вони підписують це свідоцтво в Бадахосі, 30 червня 2008 р. Підписано: Луїс М.ГернандесМартін Професор, завідувач кафедри біомедичних наук Підписано: Ізабель ОлівероЖіменес, професор кафедри біомедичних наук

Скорочення Р Фосфат СТР Electroforesisengeldepoliacrilamida (PolyacrylamideGelElectrophoresis) п.н. Pardebases PCR Reacciónencadenadelapolimerasa (polymerasechainreaction) Пі Fostatoinorgánico ПКС VíadetransduccióndeseñalesmediadaporPkc1p ФМСФ Fluorurodefenilmetilsulfonilo Pro пролин ПВХ Compartimentoprevacuolar (prevacuolarcompartment) RE ендоплазматичнийретикулум SDS Dodecilsulfatodesodio SDS-PAGE Electroforesisengeldepoliacrilamidaencondicionesdesnaturalizantes (ДСН PolyacrylamideGelElectrophoresis) Ser серин синг BasededatosdelgenomadeSaccharomycescerevisiae (SaccharomycesGenomeDatabase) TEMED тетраметілетілендіамін TFN Ácidotrifluoroacético Thr Треонін (треонін) Tm Температура плавлення Тріс Тришидроксиметиламінометан UDP Уридиндіфосфат VATPase H + ATPвакуолярний мембранний прохід VPS Гени, пов'язані з транспортом білка у вакуолю (всмоктування вакуолярного білка) VRG-глілювання та пов'язане з резистентністю виробництво Gglinaldata та пов'язане з резистентністю мутанти) 6

Вступ Рисунок 0.3. Схематичні резюме різних етапів біосинтезу нолігосахариду в ендоплазматичній сітці. Синтез олігосахариду починається з перенесення N-ацетилглюкозамінфосфату з фосфату уридин-фосфату (UDP) NAcGlc у приєднаний додолігол-фосфат-дандолугаранацглкппдол., 1980). Додано ще чотири манози та три глюкози відповідно до визначеної послідовності реакцій через серію специфічних глікозилтрансфераз. Ці трансферази кодуються генами salg (аспарагін зв’язаного глікозилювання), активність яких зазначена на малюнку. Трансмембранна транслокація гептасахариду, зв’язаного з алкоголем, не відома в деталях з біохімічної точки зору; у дріжджів відомо, що продукт цього 2002, вже необхідний., 2002., 2008. одинадцять

Введення чистого негативного заряду на поверхню клітини, що може представляти перевагу в деяких середовищах, однак не вдалося повністю встановити точну функцію цих груп на біосинтетичному шляху (jigamiyodani, 1999). Рисунок 0.5. Розташування маннозилфосфатних груп у нолігосахаридах та олігосахаридах. Акцепторні послідовності маннозилфосфатів позначені зеленим та червоним кольорами. Баллу та його колеги провели перші дослідження щодо переносу фосфатних груп маннану в нолігосахариди 30 років тому. Вони виділили двох безумовних мутантів з дефектом маннану mnn4 (Ballou et al., 1973; Raschke et al., 1973) та mnn6 (Karson and Ballou, 1978), який показав повну відсутність фосфатних груп в олігосахаридах, пов'язаних з маннопротеїнами. Крім того, вони встановили метод вимірювання активності маннозилтрансферази (Karson and Ballou, 1978) і встановили пряму кореляцію між вмістом фосфатів і спорідненістю клітини до катіонного алканового синього барвника (Ballou et al., 1973; Raschkeetal., 1973 ).